T4 DNA LIGÁZA
Katalyzuje formaci fosfodiesterové vazby mezi 5’ fosfátem a 3’ OH skupinou v DNA nebo RNA. Tento enzym opravuje jednořetězcové štěpy v DNA, RNA nebo hybridních molekulách DNA/RNA. Také spojuje DNA fragmenty s kohesivními nebo tupými konci. Nevykazuje ovšem žádnou aktivitu na jednořetězcových koncích nukleových kyselin. Ke své činnosti vyžaduje jako kofaktor ATP.
Nejčastější využití
• Klonování fragmentů s kohezivními a tupými konci do připraveného vektoru
• Klonování produktů PCR
• Metoda AFLP (Amplified fragment length polymorphism)
• Oprava štěpů v nukleových kyselinách
• Recirkularizace lineární DNA
———————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————
T4 RNA LIGÁZA
T4 RNA ligázy katalyzují ATP-dependentní formaci fosfodiesterových vazeb mezi 5′-fosfátem a 3′-hydroxylovou skupinou oligonukleotidů, jednořetězcovou (ss) RNA nebo DNA. Nejvyšší aktivita je u ligace mezi RNA a RNA, nižší pro RNA-DNA a nejnižší pro DNA –DNA.
Nejčastější využití
• Značení jednořetězcového 3’ konce RNA nebo DNA
• Spojování RNA s DNA
• Specifické modifikace tRNA
• Ligace oligodeoxyribonukleotidů k jednořetězcové cDNA při 5′ RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends)