Proteináza K
Jedná se o endolytickou serinovou proteázu, která štěpí peptidické vazby v alifatických, aromatických nebo hydrofobních aminokyselinách. Nejmenší enzym, který může být hydrolyzován Proteinázou K je tetrapeptid. Enzym je aktivní při širokém rozsahu podmínek.
Nejčastější využití
• Při izolacích genomové DNA
———————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————–—————–
T4 polynukleotid kináza
Enzym katalyzuje přenos γ-fosfátu z ATP na 5’-OH skupinu jedno- a dvouřetězové DNA, RNA. V přítomnosti ADP T4 polynukletid kinázy vykazuje 5’ fosfatázovou aktivitu a katalyzuje výměnu fosfátových skupin mezi 5′-P-oligo-polynukleotidy a ATP. Vykazuje také 3’ fosfatázovou aktivitu. Fosforylační reakce je zesílena přídavkem polyetylen glykolu a spermidinu.
Nejčastější využití
• Značení nukleových kyselin na 5’ koncích jako hybridizační sondy, sondy pro mapování transkriptu, primery pro sekvenování DNA a PCR primery.
• Fosforylace fragmentů DNA a RNA na jejich 5’ koních
• Odstranění 3’ fosfátových skupin
———————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————–—————–
Alkalická fosfatáza
Alkalická fosfatáza katalyzuje odstranění 5’ a 3’ fosfátových skupin u DNA a RNA. Enzym rovněž odstraňuje fosfátové skupiny z proteinů.
Nejčastější využití
• Defosforylace klonovacích vektorů DNA pro zabránění recirkularizace během ligace
• Defosforylace DNA fragmentů na jejich 5’ konci před značením T4 polynukleotid kinázou
• Defosforylace proteinů